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28365365备用网址 @ 2016-08-31 , 15:01
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小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ESA试剂盒科研尝试–28365365备用网址

  365备用官网,小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ELISA试剂盒科研实验标本要求

  1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

  2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

  订购Elisa试剂盒客户须知

  1、液体类标本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等);

  2、样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70℃保存;

  3、请提前告诉我们:您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。

  保存条件及有效期

  1.试剂盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6个月

  计算

  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

  产品名称:小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ELISA试剂盒科研实验

  规格:96T/48T

  检测标本:血清,血浆,尿液,胸腹水,脑脊液,细胞培养上清,组织匀浆等。

  检测方法:ELISA

  运输保存:2-8保存6个月

  种属:人,大鼠,小鼠,牛,鸡,马,兔子,猪,犬,猴,羊,鱼等。

  检测范围:96T

  0.3nmol/ml-12nmol/ml

  使用目的:

  本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)含量。

  实验原理

  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)水平。用纯化的小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入葡萄糖6磷酸异构酶(GPI),再与HRP标记的葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下成蓝色,并在酸的作用下成最终的。颜色的深浅和样品中的葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)浓度。

  小鼠葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)ELISA试剂盒科研实验操作步骤

  1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

  2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50l,待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

  3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

  4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

  5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

  6.加酶:每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。

  7.温育:操作同3。

  8.洗涤:操作同5。

  9.显色:每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。

  10.终止:每孔加终止液50l,终止反应(此时蓝色立转)。

  11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

  标本的采取和保存

  可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份。有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。大部分ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清。制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固收缩后即可取得。除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在ELISA中血浆和血清可同等应用。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非性显色。

  血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存。冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下混和,不要在混匀器上强烈振荡。混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,后再检测。反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存。保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂。

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  ELISA中常见问题

  1洗板可能原因:1)采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。2)采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。3)反应板过多造成洗板等待时间长。解决办法:1)洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干;2)合理安排,或多用几台洗板机。

  2显色可能原因:1)显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂;2)加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法:1)显色剂尽量在临用前配制,不用过期显色剂,可见浅蓝色的TMB显色剂不用;2)加样时保持显色剂不外流;3)A、B液应避免接触金属器械。

  3终止可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。

  

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